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重组磷脂酶C的改性怎么使用层析冷柜

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  层析冷柜在重组磷脂酶C的改性应用,其特征在于:包括以下步骤:

      1、修饰剂SSmPEG的制备:向烧瓶中加入2g分子量为5000的单甲氧基聚乙二醇mPEG,再加入4mLNN二甲基甲酰胺,充分溶解;随后加入0.12g丁二酸酐,密封混匀,于100℃边搅拌边加热3h;待反应物冷却后于层析冷柜中逐滴加入10mL乙醚,将所得沉淀过滤干燥;干燥后的沉淀用二氯甲烷复溶,再用乙醚沉淀,重复四次;所得沉淀产物真空干燥,在干燥器中保存备用;将上述终产物溶于4mL NN二甲基甲酰胺,加入0.46g N羟基琥珀酰亚胺和0.825g二环己基碳二亚胺,30℃溶解过夜,将反应产物置于层析冷柜中冷却至0℃,逐滴加入40mL乙醚,将所得沉淀过滤干燥;干燥后的沉淀用二氯甲烷复溶,再用乙醚沉淀,重复四次;终沉淀产物即为活化的聚乙二醇,将其干燥,备用;

      2、修饰酶的制备:将SSmPEG和磷脂酶C030的摩尔比例溶解于体积为10mLpH7.2,浓度为25mMTrisHCl缓冲液中,在室温下震荡反应一定时间,用透析袋4℃透析过夜,所得的修饰酶液冷冻干燥后备用。欣谕层析冷柜www.gy17.cn可定制非标层析柜。15403523603905.jpg

 


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